做過細胞轉染的朋友，可能都有面臨過這樣的尷尬：效率非常低。

HighGene 轉染試劑是一種新型高效的陽離子聚合物。它可以與核酸（包括質粒、siRNA、寡聚核苷酸）相互作用形成一種復合物將核酸轉運到真核細胞內，適用于大部分真核細胞的細胞轉染，對于貼壁細胞和懸浮細胞轉染同樣適用。組分經過改良優化，性質穩定，重復性好，細胞毒性很低，轉染后無需更換細胞培養液。

貼壁細胞轉染

（以 HEK293T 細胞為例）

1. 第一天，將 HEK293T 細胞接種到 24 孔板中，細胞密度控制在 50%-70% 為宜；（注：根據實驗需求，可以選擇不同的細胞培養裝置）

2. 第二天，取 1 μg 質粒加入到盛有 50 μL 無血清 DMEM 基礎培養基離心管中，標記為 A 液；取 2 μL HighGene 轉染試劑加入到另一個盛有 50 μL 無血清 DMEM 基礎培養基離心管中，標記為 B 液；（注：MEM、1640、F12 等基礎培養基均可用于 HighGene 轉染試劑的溶劑）

3. 將 50 μL 含有 HighGene 轉染試劑 B 液滴加到 50 μL 含有質粒 A 液中，用移液槍輕輕吹打幾次混勻，室溫靜置 15～20 分鐘；

4. 將 100 μL HighGene 轉染試劑 / 質粒復合物均勻滴加到 24 孔細胞培養板孔中，輕輕搖動細胞培養板使其均勻分布；

5. 細胞轉染 4～6 小時后，更換新鮮完全培養基；（可選）

6. 細胞轉染 24～48 小時后，即可使用適當方式進行檢測，如 RT-PCR、Western、ELISA、報告基因等，或加入相應篩選藥物（G418 或 Puromycin）獲得穩定細胞株

懸浮細胞轉染

（以 HEK293F 細胞為例）

1. 第一天，將 HEK293F 細胞接種 30 mL 細胞懸液到 125 mL 搖瓶中，細胞密度控制在（1.0-1.5）×106 為宜；

2. 第二天，取 30 μg 質粒加入到盛有 1.5 mL DMEM 基礎培養基離心管中，標記為 A 液；取 60 μL HighGene 轉染試劑加入到另一個盛有 1.5mL DMEM 基礎培養基離心管中，標記為 B 液；

3. 將 1.5 mL 含有 HighGene 轉染試劑 B 液滴加到 1.5 mL 含有質粒 A 溶中，用移液槍輕輕吹打幾次混勻，室溫靜置 15～20 分鐘；

4. 將 3 mL HighGene 轉染試劑 / 質粒復合物均勻滴加到盛有 30 mL HEK293F 懸浮細胞的 125 mL 搖瓶中，輕輕搖動搖瓶使其混合均勻；

5. 細胞轉染 5 天后，根據蛋白表達的情況（胞內表達或分泌表達），收集細胞或細胞培養上清，進行后續蛋白純化操作

注意事項

1. 轉染前細胞應處于良好的生長狀態（對數生長期為佳），推薦細胞傳代后 12～24 小時內、細胞密度為 60～70% 時進行轉染；

2. 使用高質量的質粒有利于獲得較高的轉染效率，推薦使用無內毒素質粒抽提試劑盒抽提質粒；

3. 在細胞轉染實驗中，根據細胞轉染效率可適當調整質粒與轉染試劑的用量比例，一般質粒的量（μg）與 HighGene 轉染試劑劑量（μL）使用比例在 1:1～1:4 之間，推薦比例為 1:2

HighGene 轉染試劑檢測圖片

在 6 孔細胞板中分別接種 293T、HCT116、C6 三種細胞，細胞密度為 60% 左右，分別使用 HighGene 轉染試劑和兩種市面同類產品進行細胞轉染，GFP 真核表達質粒用量均為 2 μg，細胞轉染 48 小時后，在熒光顯微鏡下觀察并拍照。

在 6 孔細胞板中接種 293T 和 HeLa 細胞，細胞密度為 60% 左右，使用 HighGene 轉染試劑進行細胞轉染，GFP 真核表達質粒用量為 2 μg，細胞轉染 48 小時后，在熒光顯微鏡下觀察并拍照。

在 125 mL 搖瓶中接種 30mL 密度為 1 x106 HEK293F 懸浮細胞，使用 HighGene 轉染試劑進行細胞轉染，GFP 真核表達質粒用量為 30 μg，細胞轉染 48 小時后，在熒光顯微鏡下觀察并拍照。

在 6 孔細胞板中接種 293T 細胞，細胞密度為 60% 左右，使用 HighGene 轉染試劑進行細胞轉染，GFP 真核表達質粒用量為 2 μg，細胞轉染 16、36、48 小時后，在熒光顯微鏡下觀察并拍照。