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提取外泌體先看這兩種方法

發(fā)布時間:2018-09-05 09:26 信息來源: 閱讀次數(shù):

Exosome (外泌體)是活細胞分泌的直徑約為 30-150 nm 的膜性囊泡,天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液和母乳。Exosome 攜帶了包含細胞溶質蛋白、 參與細胞內信號轉導的蛋白、各種代謝酶、熱休克蛋白和四跨膜蛋白及特殊蛋白質,參與細胞活動的重要調控,有望成為多種疾病的早期診斷標志物。 Exosome 在作為基因和藥物運載、腫瘤腫瘤和腫瘤生物學研究方面已經(jīng)成為熱點。

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沉淀法

GSTM Exosome Isolation Reagent 是用于快速高效地從血清血漿、細胞培養(yǎng)上清、腦脊液和尿液中提取 exosome 的試劑盒,僅需通過簡單混勻和常規(guī)離心即可從樣本中獲取大量 結構完整的 exosome,比傳統(tǒng)的超速離心法節(jié)省時間和樣本。以 GSTMExosome Isolation Reagent 提取的 exosome 可根據(jù)實驗目的用于后續(xù)多種實驗,應用范圍廣泛。

■ 優(yōu)勢

1. 操作簡單,無需超速離心,省時省力; 

2. 純度高,富集量大,應用范圍廣; 

3. 獲取的 Exosome 結構和功能完整; 

4. 穩(wěn)定性好,便于運輸,便于保存。

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柱提法

GSTM Exosome Isolation Kit(柱提式)應用了柱提式的提取分離技術,一步法分離出血漿 / 血清 / 細胞上清液中的外泌體,調節(jié)結合條件后,外泌體被吸附在柱子的膜上,而雜質不被吸附而去除。柱子經(jīng)洗滌后去除雜質,最后洗脫出外泌體。得到的外泌體可用于 WB、質譜、QPCR 檢測、高通量測序等實驗。

■ 優(yōu)勢

1. 操作簡易:不需要超速離心,分離時間小于 1 小時;

2. 高得率:分離的外泌體顆粒量可媲美超速離心;

3. 分離高純度的外泌體:外泌體純度 >95%;

4. 分離的外泌體形態(tài)完整。

■ 本試劑盒分離的外泌體鑒定

根據(jù)國際細胞外囊泡協(xié)會于 2014 年發(fā)表的一個指導手冊(MISEV),鑒定外泌體首先需要通過 WB 來鑒定細胞外囊泡的標志蛋白是否存在于樣品中,通過電子顯微鏡來觀察樣品中細胞外囊泡的形態(tài)特征,通過 NTA 等手段來分析樣品中細胞外囊泡的群體特征(粒子濃度、直徑分布等)。

外泌體 WB 檢測(本試劑盒與 PEG 原理的試劑盒對比)

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Western Blot 進行外泌體鑒定,CD9 條帶清晰可見。本試劑盒提取的外泌體蛋白檢測條帶單一,純度比 PEG 原理的提取試劑盒更高。

外泌體電鏡檢測

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電鏡結果顯示,外泌體呈囊泡狀,粒徑大小約為 120 nm,與文獻中報道的 30-150 nm 一致。

外泌體粒徑檢測

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Nanosight 進行粒徑檢測,粒徑均一,平均粒徑為 128 nm ,與文獻報道相符。