1. 新建細(xì)胞系/株以及新型細(xì)胞基質(zhì)。

2. 某些傳代細(xì)胞已證明在一定代次內(nèi)不具有成瘤性，而超過一定代次則具有成瘤性（如Vero）。

3. 用于疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞系/株應(yīng)進(jìn)行成瘤性檢查，但當(dāng)未經(jīng)遺傳修飾的二倍體細(xì)胞被證明無成瘤性后，可以不作為常規(guī)檢查要求。

注：已證明具有成瘤性的傳代細(xì)胞（如BHK21，CHO，C127等），或細(xì)胞類型屬成瘤性細(xì)胞（如雜交瘤細(xì)胞等），用于生產(chǎn)治療性產(chǎn)品時可以不再做成瘤性檢查。

目前使用比較廣泛的成瘤性檢查方法有動物接種法（體內(nèi)）和軟瓊脂克隆形成實驗（體外）。其中，體內(nèi)法為評價的標(biāo)準(zhǔn)，但對某些細(xì)胞而言，體外法的結(jié)果也可以作為細(xì)胞成瘤性檢查的參考，尤其是低代次、在動物體內(nèi)無成瘤性的傳代細(xì)胞系。

將待檢測細(xì)胞接種于皮下或者肌肉內(nèi)注射。至少觀察16周接種部位是否有進(jìn)行性結(jié)節(jié)形成，對出現(xiàn)的結(jié)節(jié)開始消退的動物，應(yīng)在觀察期末處死。不能形成進(jìn)行性結(jié)節(jié)的細(xì)胞，不視為具有成瘤性。通常用 HeLa 或 HeLa S3細(xì)胞或其他已知成瘤性細(xì)胞作陽性對照，且對照組至少設(shè)10只動物，試驗才視為有效。在觀察期末，處死所有動物，對注射部位及其他部位 (如心臟、肺、肝、脾、腎、腦及局部淋巴結(jié))進(jìn)行觀察和組織病理學(xué)檢查，判斷是否有接種細(xì)胞增生，進(jìn)一步判定接種細(xì)胞是否形成腫瘤或有轉(zhuǎn)移瘤。

使用低熔點瓊脂模擬細(xì)胞在體內(nèi)的微環(huán)境培養(yǎng)細(xì)胞，通常使用其它已知具有成瘤性的細(xì)胞作為陽性對照，對照組與實驗組同步操作。常規(guī)培養(yǎng)3周左右，培養(yǎng)過程中可視情況適當(dāng)?shù)匮a充細(xì)胞培養(yǎng)液，直到陽性組在顯微鏡下明顯觀察到大量細(xì)胞集落，培養(yǎng)終止。使用4%多聚甲醛固定，結(jié)晶紫染色，在顯微鏡下觀察并拍照記錄。

歐洲EMA、美國FDA以及WHO針對干細(xì)胞、體細(xì)胞、成體干細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞、基因治療產(chǎn)品以及生產(chǎn)用動物細(xì)胞培養(yǎng)物等發(fā)布了多項指導(dǎo)原則。EMA在《人體細(xì)胞醫(yī)療產(chǎn)品的指導(dǎo)原則》中表示“如果可以預(yù)見細(xì)胞轉(zhuǎn)化風(fēng)險則應(yīng)該展開成瘤性研究，重點檢測其增殖能力以及染色體完整性”，在《干細(xì)胞醫(yī)療產(chǎn)品反思文件》中提到“多能干細(xì)胞和體干細(xì)胞都存在腫瘤形成風(fēng)險，培養(yǎng)條件可能會嚴(yán)重影響干細(xì)胞的基因組的不穩(wěn)定，延長細(xì)胞培養(yǎng)有助于評估成瘤性和染色體穩(wěn)定性”。

FDA指導(dǎo)原則認(rèn)為控制hESC衍生的細(xì)胞產(chǎn)品中未分化的ESC或其他細(xì)胞雜質(zhì)水平是成瘤性風(fēng)險評價的主要方面，采用細(xì)胞增殖測定法和軟瓊脂集落形成法測定惡性轉(zhuǎn)化細(xì)胞，以檢測最終產(chǎn)品中的雜質(zhì)細(xì)胞是否超過了最小腫瘤產(chǎn)生劑量。FDA還重點討論了臨床前實驗物種的選擇和動物模型的預(yù)測能力，以評估植入細(xì)胞到達(dá)移植部位微環(huán)境中是否形成腫瘤，以及引起宿主細(xì)胞和植入細(xì)胞在各組織器官中發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)化的風(fēng)險。