1101無菌檢查法

無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器 械 具、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法。若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定,僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。

無菌檢查應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無菌檢查的要求，檢驗(yàn)全過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響 供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及受控環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。日常檢驗(yàn)還需對試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測。

培養(yǎng)基

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌培養(yǎng)；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)。

培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基可按以下處方制備，亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基或成品培養(yǎng)基。配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基。若不即時(shí)使用，應(yīng)置于無菌密閉容器中，在 2～25℃、避光的環(huán)境下保存，并在經(jīng)驗(yàn)證的保存期內(nèi)使用。

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 為弱堿性，煮沸，濾清，加入葡萄糖和刃天青溶液，搖勻，調(diào)節(jié) pH，使滅菌后在 25℃ 的 pH 值為 7.1±0.2。分裝至適宜的容器中，其裝量與容器高度的比例應(yīng)符合培養(yǎng)結(jié)束后培養(yǎng)基氧化層（粉紅色）不超過培養(yǎng)基深度的 1/2。滅菌在供試品接種前，培養(yǎng)基氧化層的高度不得超過培養(yǎng)基深度的 1/53，否則，須經(jīng)100℃ 水浴加熱至粉紅色消失（不超過 20 分鐘），迅速冷卻，只限加熱一次，并防止被污染。

除另有規(guī)定外，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基置 30～35℃培養(yǎng)。

2. 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基

胰酪胨 17.0g

大豆木瓜蛋白酶水解物 3.0g

葡萄糖/無水葡萄糖 2.5g/2.3g

氯化鈉 5.0g

磷酸氫二鉀 2.5g

水 1000ml

除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，必要時(shí)濾過使澄清，調(diào)節(jié) pH 使滅菌后在 25℃的 pH 值為 7.3±0.2，加入葡萄糖，分裝，滅菌。

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基置 20～25℃培養(yǎng)。

3. 中和或滅活用培養(yǎng)基

按上述硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的處方及制法， 在培養(yǎng)基滅菌前或使用前加入適宜的中和劑、滅活劑或表面活性劑，其用量同方法適用性試驗(yàn)。

4. 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基

胰酪胨 15.0g

大豆木瓜蛋白酶水解物 5.0g

氯化鈉 5.0g

瓊脂 15.0g

水 1000ml

除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 使滅菌后在 25℃的 pH 值為 7.3±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后，搖勻，分裝，滅菌。

5. 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基

動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g

葡萄糖 20.0g

水 1000mL

除葡萄糖外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 使滅菌后在 25℃的 pH 值為 5.6±0.2，加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。

6. 沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

動(dòng)物組織胃蛋白酶水解物和胰酪胨等量混合物 10.0g

葡萄糖 40.0g

瓊脂 15.0g

水 1000mL

除葡萄糖、瓊脂外，取上述成分，混合，微溫溶解，調(diào)節(jié) pH 使滅菌后在 25℃的 pH 值為 5.6±0.2，加入瓊脂,加熱溶化后, 再加入葡萄糖，搖勻，分 裝，滅菌。

7. 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）

馬鈴薯(去皮) 200g

葡萄糖 20.0g

瓊脂 14.0g

水 1000mL

取馬鈴薯，切成小塊，加水 1000mL，煮沸 20-30 分鐘，用 6-8 層紗布過 濾，取濾液補(bǔ)水至 1000ml，調(diào)節(jié) pH 使滅菌后在 25℃的 pH 值為 5.6±0.2，加入瓊脂，加熱溶化后, 再加入葡萄糖，搖勻，分裝，滅菌。

培養(yǎng)基的適用性檢查

無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。本檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。

無菌性檢查 每批培養(yǎng)基隨機(jī)取不少于 5 支（瓶），置各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng) 14 天，應(yīng)無菌生長。

靈敏度檢查

菌種 培養(yǎng)基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過 5 代（從菌種保存 中心獲得的干燥菌種為第 0 代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行和確認(rèn)，以保證試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性。

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26003〕

銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B) 10104〕

枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）〔CMCC(B)63501〕

生孢梭菌(Clostridium sporogenes)〔CMCC(B) 64941〕

白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F) 98001〕

黑曲霉(Aspergillusniger) 〔CMCC(F) 98003〕

菌液制 備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中或胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基上，接種生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng) 18～24 小時(shí)；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng) 基上，20～25℃培養(yǎng) 2～3 天，上述培養(yǎng)物用 pH7.0 無菌氯化鈉- 蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度菌懸液。接種黑曲霉至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，20～25℃培養(yǎng) 5～7 天或直到獲得豐富的孢子，加入適量含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80 的 pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含 0.05％（ml/ml）聚山梨酯 80 的 pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或 0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的孢子懸液。菌懸液若在室溫下放置，一般應(yīng)在 2 小時(shí)內(nèi)使用；若保存在 2～8℃可在 24 小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在 2～8℃，在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用。

培養(yǎng)基接種 取適宜裝量的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 7 支，分別接種不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌各2支， 另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)不超過3天；取適宜裝量的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 7 支,分別接種不大于 100cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)不超過5天。

結(jié)果判定 空白對照管應(yīng)無菌生長，若加菌的培養(yǎng)基管均生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)定。

稀釋液、沖洗液及其制備方法

稀釋液、沖洗液配制后應(yīng)采用驗(yàn)證合格的滅菌程序滅菌。

1. 0.1%無菌蛋白胨水溶液 取蛋白胨 1.0g，加水 1000ml，微溫溶解，必要時(shí)濾過使澄清，調(diào)節(jié) pH 值至 7.1±0.2，分裝，滅菌。

2. pH7.0 無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液 取磷酸二氫鉀 3.56g，無水磷酸氫二 鈉 5.77g，氯化鈉 4.30g，蛋白胨 1.00g，加水 1000ml，微溫溶解，必要時(shí)濾過使澄清分裝，滅菌。

根據(jù)供試品的特性，可選用其他經(jīng)驗(yàn)證的適宜溶液作為稀釋液、或沖洗液(如 0.9%無菌氯化鈉溶液)。

如需要，可在上述稀釋液或沖洗液的滅菌前或滅菌后加入表面活性劑或 中和劑等。

方法適用性試驗(yàn)進(jìn)行產(chǎn)品無菌檢查時(shí)，應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的無菌檢查。若檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)， 應(yīng)重新進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)。

方法適用性試驗(yàn)按“供試品的無菌檢查”的規(guī)定及下列要求進(jìn)行操作。對每一試驗(yàn)菌應(yīng)逐一進(jìn)行方法確認(rèn)。

菌種及菌液制備 金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌株及菌液制備同培養(yǎng)基靈敏度檢查。大腸埃希菌（Escherichia coli ）[CMCC(B) 44102]的菌液制備同金黃色葡萄球菌。

薄膜過濾法 按供試品的無菌檢查要求取每種培養(yǎng)基規(guī)定接種的供試品總量，采用薄膜過濾法過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入 小 于不大于 100cfu 的試驗(yàn)菌，過濾。加至濾筒內(nèi)，接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭菌的濾筒內(nèi)加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基；接種枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉的濾筒內(nèi)加胰 酪大豆 胨液體培養(yǎng)基。另取一裝有同體積培養(yǎng)基的容器，加入等量試驗(yàn)菌， 作為對照。置規(guī)定溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得超過 5 天。

直接接種法 取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基 6 管，分別接入不大于 100cfu 的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、生孢梭 菌各 2 管，；取符合直接接種法培養(yǎng)基用量要求的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 6 管， 分別接入不大于100cfu 的枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各 2 管。其中 1 管按供試品的無菌檢查要求接入每支培養(yǎng)基規(guī)定的供試品接種量，另 1 管作為對照，置規(guī)定的溫度培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不得超過 5 天。

結(jié)果判斷 與對照管比較，如含供試品各容器中的試驗(yàn)菌均生長良好，則說明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下無抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不計(jì)，照此檢查方法和檢查條件進(jìn)行供試品的無菌檢查。如含供試品的任一容 器中的試驗(yàn)菌生長微弱、緩慢或不生長，則說明供試品的該檢驗(yàn)量在該檢驗(yàn)條件下有抑菌作用，應(yīng)采用增加沖洗量、增加培養(yǎng)基的用量、使用中和劑或 滅活劑、更換濾膜品種等方法，消除供試品的抑菌作用，并重新進(jìn)行方法適 用性試驗(yàn)。

方法適用性試驗(yàn)也可與供試品的無菌檢查同時(shí)進(jìn)行。

供試品的無菌檢查

無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性質(zhì)允許，應(yīng)采用薄膜過濾法。供試品無菌檢查所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法相同。

無菌試驗(yàn)過程中，若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑，應(yīng)證 明其有效性，且對微生物無毒性。

檢驗(yàn)數(shù)量 檢驗(yàn)數(shù)量是指一次試驗(yàn)所用供試品最小包裝容器的數(shù)量 ，成品 每亞批均應(yīng)進(jìn)行無菌檢查。除另有規(guī)定外，出廠產(chǎn)品按表 1 規(guī)定；上市產(chǎn)品 監(jiān)督檢驗(yàn)按表 2 規(guī)定。表 1、表 2 中最少檢驗(yàn)數(shù)量不包括陽性對照試驗(yàn)的供試 品用量。

檢驗(yàn)量 是指供試品每個(gè)最小包裝接種至每份培養(yǎng)基的最小量（g 或 ml）。除另有規(guī)定外,供試品檢驗(yàn)量按表 3 規(guī)定。若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定 足夠接種兩種培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液 體培養(yǎng)基。采用薄膜過濾法時(shí)，只要供試品特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的內(nèi)容物全部過濾。

陽性對照 應(yīng)根據(jù)供試品特性選擇陽性對照菌：無抑菌作用及抗革蘭陽性 菌為主的供試品，以金黃色葡萄球菌為對照菌；抗革蘭陰性菌為主的供試品， 以大腸埃希菌為對照菌；抗厭氧菌的供試品，以生孢梭菌為對照菌；抗真菌 的供試品，以白色念珠菌為對照菌。陽性對照試驗(yàn)的菌液制備同方法適用性 試驗(yàn)，加菌量不大于 100cfu，供試品用量同供試品無菌檢查時(shí)每份培養(yǎng) 基接種的樣品量。陽性對照管培養(yǎng)不超過 5 天，應(yīng)生長良好。

陰性對照 供試品無菌檢查時(shí)，應(yīng)取相應(yīng)溶劑和稀釋液、沖洗液同法操作， 作為陰性對照。陰性對照不得有菌生長。

供試品處理及接種培養(yǎng)基

操作時(shí)，用適宜的方 法對供試品容器表面進(jìn)行徹底消毒，如果供 試品容器內(nèi)有一定的真空度，可用適宜的無菌器材（如帶有除菌過濾器的針 頭）向容器內(nèi)導(dǎo)入無菌空氣，再按無菌操作啟開容器取出內(nèi)容物。

除另有規(guī)定外，按下列方法進(jìn)行供試品處理及接種培養(yǎng)基。

1. 薄膜過濾法

薄膜過濾法一般應(yīng)采用封閉式薄膜過濾器 ，根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。無菌檢查用的濾膜孔徑應(yīng)不大于 0.45μm。濾膜直徑約為 50mm，若使用其他尺寸的濾膜，應(yīng)對稀釋液和沖洗液體積進(jìn)行調(diào)整,并重新驗(yàn)證。使用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。

水溶性供試液過濾前，一般應(yīng)先將少量的沖洗液過濾，以潤濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為 100ml，總沖洗 量一般不超過500ml，最高不得超過 1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。

水溶性液體供試品取規(guī)定量，直接過濾，或混合至含不少于 100ml適宜稀釋液的無菌容器中，混勻，立即過濾。如供試品具有抑菌作用，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于三次，所用的沖洗量、沖洗方法同方 法適用性試驗(yàn)。除生物制品外，一般樣品沖洗后，1份濾器加入 100ml 硫乙醇 酸鹽流體培養(yǎng)基，1份濾器加入 100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。生物制品樣品 沖洗后，2份濾器加入 100ml 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1份濾器加入 100ml 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。

水溶性固體和半固體供試品取規(guī)定量，加適宜的稀釋液溶解或按標(biāo)簽說明復(fù)溶，然后照水溶性液體供試品項(xiàng)下的方法操作。

非水溶性供試品取規(guī)定量，直接過濾；或混合溶于適量含聚山梨酯 80或 其他適宜乳化劑的稀釋液中，充分混合，立即過濾。用含 0.1%～1%聚山梨酯 80 的沖洗液沖洗濾膜至少 3 次。加入含或不含聚山梨酯 80 的培養(yǎng)基。接種培養(yǎng)基照水溶性液體供試品項(xiàng)下的方法操作。

可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和黏性油劑供試品取規(guī)定量，混合至適量 的無菌十四烷酸異丙酯中，劇烈振搖，使供試品充分溶解，如果需要可適當(dāng)加熱，加熱溫度一般不超過40℃，最高不得超過44℃，趁熱迅速過濾。對仍然無法過濾的供試品，于含有適量的無菌十四烷酸異丙酯中的供試液中加入不少于 100ml 的適宜稀釋液，充分振搖萃取，靜置，取下層水相作 為供試液過濾。過濾后濾膜沖洗及接種培養(yǎng)基照非水溶性供試品項(xiàng)下的方法操作。

無菌氣霧劑供試品取規(guī)定量，采用專用設(shè)備將供試品轉(zhuǎn)移至封閉

式薄膜過濾器中。或?qū)⒏魅萜髦茫?0℃或其他適宜溫度冷凍約 1 小時(shí)，取出，迅速消毒供試品開啟部位或閥門。正置容器，用無菌鋼錐或針樣設(shè)備以無菌操作迅速在與容器閥門結(jié)構(gòu)相匹配的適宜位置鉆一小孔，不同容器鉆孔大小和深度應(yīng)保持基本一致，鉆孔后應(yīng)無明顯拋射劑拋出。輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使拋射劑緩緩釋出。釋放拋射劑后再無菌開啟容器，并將供試液轉(zhuǎn)移至無菌容器中混合，必要時(shí)用沖洗液沖洗容器內(nèi)壁。供試品亦可采用其它適宜的方法取出。然后照水溶性液體供試品或非水溶性供試品項(xiàng)下的方法操作。

裝有藥物的注射器供試品取規(guī)定量，將注射器中的內(nèi)容物（若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解）直接過濾，或混合至含適宜稀釋液的無菌容器中，然后照水溶性液體或非水溶性供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法對包裝中所配帶的針頭等要求無菌的部件進(jìn)行無菌檢查。

具有導(dǎo)管的醫(yī)療器械(輸血、輸液袋等)供試品除另有規(guī)定外，取規(guī)定量，每個(gè)最小包裝用適量的（通常 50～100ml）沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，收集沖洗液于無菌容器中，然后照水溶性液體供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用適宜的方法對包裝中所配帶的針頭等要求無菌的部件進(jìn)行無菌檢查。

2. 直接接種法

直接接種法適用于無法用薄膜過濾法進(jìn)行無菌檢查的供試品，即取規(guī)定量供試品分別等量接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。除生物制品外，一般樣品無菌檢查時(shí)兩種培養(yǎng)基接種的瓶或支數(shù)相等；生物制品無菌檢查時(shí)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基接種的瓶或支數(shù)為 2：1。除另有規(guī)定外，每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品 體積不得大于培養(yǎng)基體積的 10%，同時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于 15ml，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基每管裝量不少于 10ml。供試品檢查時(shí)，培養(yǎng) 基的用量和高度同方法適用性試驗(yàn)。

注：①無菌十四烷酸異丙酯的制備可采用薄膜過濾法過濾除菌,選用孔徑為 0.22μm 的適宜濾膜，或其他適宜的滅菌方法。

混懸液等非澄清水溶性液體供試品 取規(guī)定量，等量接種至各管培養(yǎng)基中。

固體供試品取規(guī)定量，直接等量接種至各管培養(yǎng)基中，或加入適宜的溶劑溶解，或按標(biāo)簽說明復(fù)溶后，取規(guī)定量等量接種至各管培養(yǎng)基中。

非水溶性供試品取規(guī)定量，混合，加入適量的聚山梨酯 80 或其它適宜的乳化劑及稀釋劑使其乳化，等量接種至各管培養(yǎng)基中。或直接等量接種至含聚山梨酯 80 或其它適宜乳化劑的各管培養(yǎng)基中。

敷料供試品取規(guī)定數(shù)量，以無菌操作拆開每個(gè)包裝，于不同部位剪取約 100mg 或 1cm×3cm 的供試品，等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。

腸線、縫合線等供試品腸線、縫合線及其它一次性使用的醫(yī)用材料按規(guī)定量取最小包裝，無菌拆開包裝，等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。

滅菌醫(yī)用器械供試品除另有規(guī)定外，取規(guī)定量，必要時(shí)應(yīng)將其拆散或切成小碎段，等量接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。

放射性藥品取供試品 1 瓶(支)，等量接種于裝量為 7.5ml 的硫乙醇酸鹽 流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。每管接種量為 0.2ml。

培養(yǎng)及觀察

將上述接種供試品后的培養(yǎng)基容器分別按各培養(yǎng)基規(guī)定的溫度培養(yǎng)不少于 14 天；接種生物制品的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的容器應(yīng)分成兩等份， 一份置 30～35℃培養(yǎng)，一份置 20～25℃培養(yǎng)。培養(yǎng)期間應(yīng)定期觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng) 14 天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液不少于 1ml轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，將原始培養(yǎng)物和新接種的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)不少 于4 天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片，染色，鏡檢，判斷是否有菌。

結(jié)果判斷

陽性對照管應(yīng)生長良好，陰性對照管不得有菌生長。若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定；

若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。當(dāng)符合下列至少 一個(gè)條件時(shí)方可認(rèn)為試驗(yàn)結(jié)果無效：

（1）無菌檢查試驗(yàn)所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求。

（2）回顧無菌試驗(yàn)過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素。

（3）在陰性對照中觀察到微生物生長。

（4） 供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗(yàn)中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。

試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時(shí)，重新取同量供試品，依法檢查， 若無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長，判供試品不符合規(guī)定。

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