細(xì)胞培養(yǎng)的過程大概是這樣的：失敗—成功—體味—收獲—思考—交流，你到了哪個(gè)階段？不妨和我們一起來看看養(yǎng)細(xì)胞的那些事。

一、昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)體會(huì)

養(yǎng)了快一年的昆蟲細(xì)胞了， 而且最近又在做昆蟲血液的原代培養(yǎng)， 積累了點(diǎn)點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)， 說出來大家共勉。

首先， 要廣泛閱讀細(xì)胞培養(yǎng)方面的專業(yè)書籍， 打造自己扎實(shí)的專業(yè)基礎(chǔ)， 為以后的操作做準(zhǔn)備。 這方面的書有很多，「體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)」， 薛慶善主編， 科學(xué)出版社；「細(xì)胞實(shí)驗(yàn)指南」，D.L. 斯佩克特，ets 著， 黃培堂等譯；「細(xì)胞培養(yǎng)」， 司徒鎮(zhèn)強(qiáng)等。

其次， 每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件都不相同， 別人的經(jīng)驗(yàn)和書本上的 protocal 都只能作為參考， 真正重要的是自己培養(yǎng)過程中的不斷摸索， 這就需要對(duì)自己培養(yǎng)過程中細(xì)胞出現(xiàn)的狀況作詳細(xì)記錄， 隨時(shí)總結(jié)。

再次， 培養(yǎng)要有極大的耐心， 過程中的影響因素又很多， 這又是細(xì)活， 其過程需要考慮各種影響因素， 當(dāng)出現(xiàn)問題時(shí)一一加以排除， 找到最佳解決方案。 我在這里沒有討論細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)節(jié)問題， 因?yàn)槟菢拥脑捠钦f不完的。

二、纖維細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)

曾經(jīng)在自己制作的無細(xì)胞真皮上養(yǎng)過成纖維細(xì)胞， 無細(xì)胞真皮是按照文獻(xiàn)的方法制作的， 把成纖維細(xì)胞接種到無細(xì)胞真皮上的方法也是按書和文獻(xiàn)中的方法。 可是很奇怪， 成纖維細(xì)胞怎么都不長(zhǎng)， 我重復(fù)了好多次， 結(jié)果都是失敗。

后來又做了對(duì)照， 同樣的條件， 一個(gè)平皿中直接接種成纖維細(xì)胞， 另一個(gè)平皿中放入無細(xì)胞真皮， 再接種成纖維細(xì)胞， 結(jié)果， 沒有無細(xì)胞真皮的平皿中細(xì)胞長(zhǎng)得很好。

這樣說明不是細(xì)胞和平皿的問題， 那么問題在哪里呢？ 我苦思了很久， 覺得是不是無細(xì)胞真皮在處理的過程中用到了一些化學(xué)藥品， 對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)有害。

可是在接種細(xì)胞以前我已經(jīng)按文獻(xiàn)上的方法將無細(xì)胞真皮用 DMEM 培養(yǎng)液浸泡了 48 小時(shí)， 在后來的實(shí)驗(yàn)中我就將浸泡的時(shí)間延長(zhǎng)， 并在中間每天換浸泡液一次， 經(jīng)過 5 天的浸泡以后， 成纖維細(xì)胞的接種最終成功了。

這份遲到的成功提醒我， 對(duì)于書和文獻(xiàn)上的東西， 不能不信， 也不能全信， 很多東西還得靠自己在實(shí)驗(yàn)中摸索。

三、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)

（１） 無菌操作是一切技術(shù)的基礎(chǔ)， 切記此條。

（２）在細(xì)胞狀態(tài)好時(shí)， 乘勝追擊， 準(zhǔn)備好一切所需要的細(xì)胞原料。

實(shí)驗(yàn)同時(shí)需要采用 FCM 檢測(cè)藥物干預(yù)后細(xì)胞周期的改變， 需要做 THC，Werstern Blot，RT－PCR 等時(shí)， 可以現(xiàn)將細(xì)胞處理好后， 根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)步驟， 保存細(xì)胞標(biāo)本， 然后各個(gè)擊破， 這樣可以減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

如要收集不同濃度點(diǎn)和時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)本， 細(xì)胞處理后， 部分用來做流式測(cè)周期 （固定那步可以放置 －２０ 度數(shù)日， 待標(biāo)本收集全后一起檢測(cè)）。 部分用來細(xì)胞涂片 （固定后， 可以放 -20 度數(shù)月， 本人曾放置 3 月沒影響）。

部分用來做 Werstern Blot（將細(xì)胞離心呈粉末狀置 -80 度保存， 或者提取蛋白變性后保存， 粉末保存時(shí)間可達(dá) 2 月）。 部分用于提取 RNA 時(shí)， 可現(xiàn)加上 Trizol 混勻后， 置 -80 度保存。

原料準(zhǔn)備好后， 在根據(jù)自己的時(shí)間進(jìn)行合理安排， 多出時(shí)間查閱文獻(xiàn)。

（３）在進(jìn)行每個(gè)實(shí)驗(yàn)時(shí)， 一定要找到該實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)的 Protocal， 一步一步踏踏實(shí)實(shí)的完成， 一般都會(huì)得到比較理想的結(jié)果。

四、如何防止細(xì)胞污染

每個(gè)人都擔(dān)心細(xì)胞被污染， 每個(gè)人都有碰到自己的細(xì)胞被污染。

比較重要的幾點(diǎn)如下：

東西一定要用自己的。 既不要借別人的， 也不要借給別人。 可能大家覺得比較自私。 實(shí)際上還是很有好處的。 并不是每個(gè)人的操作都規(guī)范， 因此相互之間串著用， 很容易造成交叉污染。

我習(xí)慣口對(duì)口倒液體， 在倒前倒后都要在酒精燈上過一下。 自己認(rèn)為比起用吸管吸更能很好的防止污染。 步驟越簡(jiǎn)單， 越能防止污染， 而且還能節(jié)省很多吸管。

一次將所有的所需要試劑、工具放入工作臺(tái)。 不要做到半路， 又出工作間拿東西， 這樣增加了污染的機(jī)會(huì)。

整個(gè)操作要快、動(dòng)作要輕、而且不要干其他的事情。

一般開紫外線照射臺(tái)的時(shí)候， 就將培養(yǎng)基、酶、DTHANKS 液拿到室外讓它自然升溫。 這樣 40 分鐘后， 溫度也升上來了。 有很多人將他放到 37 度水浴鍋里加熱。 一定要注意水浴鍋的衛(wèi)生， 有的常年不清洗， 里面很臟， 容易在外面瓶身上吸附大量細(xì)菌。 因此用它的也一定要勤換水。 從水浴鍋拿出后， 最好找個(gè)毛巾插干上面的水。

操作前要洗手， 用 75%酒精搽手。用完操作臺(tái)， 要打掃衛(wèi)生。

細(xì)胞要經(jīng)常凍存， 一般只要細(xì)胞狀態(tài)好就將細(xì)胞凍存起來。 細(xì)胞狀態(tài)差了， 扔掉， 重新復(fù)蘇。 這是一個(gè)必須養(yǎng)成的習(xí)慣。

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