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發布時間:2019-04-30 16:37 信息來源: 閱讀次數: 次
實驗失敗時,最害怕的是什么?
對,就是對失敗的原因一無所知。
我們會懷疑儀器試劑、懷疑實驗方法、
懷疑操作流程,甚至懷疑人生。
常常有實驗員哭訴,為什么免疫學實驗
又雙叒叕失敗了?
殊不知,問題很有可能出現在選抗體上。
我們都知道,WB、IHC、ELISA 等常規實驗技術都不離開抗體,抗體的質量優劣關乎實驗的成敗,一旦抗體造假,不僅浪費了科研者的寶貴時間、金錢及實驗材料,甚至有可能讓研究者誤入歧途(得出一系列錯誤的實驗結果或重復性差),而這無形中會損害他們所作出的努力以及學術聲譽。
抗體造假,是整個試劑行業最嚴重的現象。據權威機構顯示,在上千份抗體產品質量投訴中,假貨問題占了 43%;在 500 份問卷調查中,有 43% 的人曾使用假冒偽劣試劑耗材;703 位生物學家,50% 無法重復自己的實驗結果。
抗體造假手段可謂是五花八門,比如:直接造假(根本不知道瓶子里裝的是什么)、用分子量接近的廉價抗體冒充昂貴的稀有抗體(很難檢測出來)等,最常見的就是稀釋抗體,把一份試劑稀釋成 5 份,導致效價下降,有時有用,有時沒用。
關于抗體質量穩定性和可靠性問題,早在 08 年,瑞士科研項目 HPA 就曾對 29 家供應商的 9,000 多種抗體(包括單抗和多抗)進行 WB 和 IHC 驗證,來檢測這些抗體是否有效。
其結果竟令人大跌眼鏡:49% 的抗體完全無效,且僅有 7% 的抗體被認為是完全有效且擁有前后實驗一致性。據估計,每年因購買質量差的抗體導致的損失達到 8 億美金。
而抗體之所以這么不穩定并難以產生有效性,究其原因,一方面是因為抗體市場龐雜帶來了抗體質量的殘次不齊,另一方面則是因為抗體本身就具有抗原交叉反應性、多樣性和實驗差異性,進而也會影響抗體的特異性和親和性。
即使是未經污染的抗體有時也會給實驗帶來困難,不同批次的抗體可能存在自然差異,它們可能靶向研究者預期之外的蛋白質。所以陰性結果可能是多種原因導致的,這種不確定性使得假冒試劑很難被發現。
現階段我們身處于抗體亂象泥潭之中,如何獲得一支真正有效的優質抗體?如何選擇和購買抗體是關鍵,想要買到性價比高的抗體,有沒有「潛」規則,如何煉就自己的火眼金睛?請繼續往下看。
一、抗體最基本的信息
1. 要購買的抗體名稱(基因名,蛋白名都可以,比如 AKT)
2. 要用于什么實驗(可用于多種實驗,比如 WB / IHC / FCM / IF)
3. 樣本是什么種屬(可用于多種種屬,比如 human / mouse / rat / rabbit)
4. 如果是磷酸化抗體的:對磷酸化位點是否有要求,最好提供要檢測的磷酸化位點,如果使用者對磷酸化位點沒有要求的,就由查到的品牌廠家來推薦,廠家會推薦他們賣得比較多而且效果比較好的磷酸化抗體。
二、單克隆和多克隆的選擇
有人認為單抗比多抗好,其實這并不是一個嚴謹的觀點,只能說在可能性上單抗的特異性更好一些,而多抗的親和力會優于單抗,并且特異性并不一定就遜于單抗,主要看抗原的設計水平。
不建議糾結于單抗好還是多抗好。在選擇上一般建議實驗種屬和抗體種屬親緣性越遠越好,不宜同源。
三、抗體選擇的「潛」規則
1. 質量好,價格便宜(性價比高,索萊寶產品價格是國外的 1/3 左右,而且有小包裝規格);
2. 到貨速度快(國外公司一般3~4周,索萊寶公司大多有現貨,最多 1 周);
3. 售前售后有保障(國外抗體咨詢投訴周期一般都非常長,索萊寶公司一般 1 周就可以解決,還可以免費索取一些抗體小樣,抗體免費試用活動正在火熱進行);
4. 抗體的運用可以多種實驗,反應物種可以多樣(實驗必須是同一類實驗,別人做 IHC 的抗體用做 WB 可能是沒有結果的);
5. 廠家官網發布出的實驗效果圖(完善的驗證數據及詳細的信息標準是優質抗體選擇的必要條件),比如是否明確標注其可以用于 WB、IHC 等實驗、是否有足夠的數據支持證明該抗體適用于某一組織或者樣本(樣本的處理過程和要求)、是否有明確的抗體建議稀釋濃度、該抗體的識別位點是連續的氨基酸序列的一級結構還是非連續性氨基酸的三維結構位點,天然的還是變性的……這些信息和數據的真實性及完整性是保證 WB、IHC 等實驗順利進行的關鍵;
6. 別找純代工的品牌多花冤枉錢,制造和生產型的供應商對自己產品更加了解,出現問題容易找到原因;
7. 一定要從正規渠道購買(生產商和制造商或正規的授權經銷商);
8. 有效的內參抗體是實驗結果真實可靠的重要憑證,尤其在 WB 實驗中,常會借助內參來校正蛋白定量、上樣過程中存在的實驗誤差。值得注意的是,不同的內參抗體只適用于一定范圍的樣本和組織,我們需要查閱參考文獻,并根據樣本和組織的差別選擇合適的內參抗體,以確保實驗的準確性,索萊寶擁有完備的標簽內參抗體庫;
9. 常言道,實踐是檢驗真理的唯一標準,對于文獻或官網中現成的已經驗證過的親和力高、特異性強的抗體,我們只需將拿來主義進行到底即可。此時仍需要特別注意的是文章的可靠性(IF>5 最好);即便如此,在相應抗體購買回來后,建議做些簡單預實驗來保證抗體的特異性。如果只有陽性有條帶,陰性沒有條帶,恭喜你,你確實買到了一支靠譜的好抗體,可以放心大膽的開始正式實驗了。
轉自騰訊網