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快速無菌檢查方法的相關(guān)法規(guī)和方法驗證要求

發(fā)布時間：2023-09-20 15:58 信息來源： 閱讀次數(shù)： 次

無菌檢查法系用于檢查藥典要求無菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器械、原料、輔料及其他品種是否無菌的一種方法。2020版中國藥典—《1101無菌檢查法》指出，無菌檢查包括薄膜過濾法和直接接種法，只要供試品性質(zhì)允許，應(yīng)采用薄膜過濾法。生物制品生產(chǎn)工藝、組成成分復(fù)雜，一般不能夠進行終端滅菌，因此，對生物制品進行嚴(yán)格的質(zhì)量控制，是降低制品中外源因子或有毒雜質(zhì)污染風(fēng)險，保證生物制品安全有效的必要措施。

無菌檢查法實際包含3個部分的實驗，分別為：培養(yǎng)基適用性檢查、方法適用性試驗和供試品的無菌檢查。

培養(yǎng)基適用性檢查主要目的有兩個，一是確認(rèn)使用的培養(yǎng)基本身是無菌的，二是確認(rèn)使用的培養(yǎng)基細菌或真菌是可以生長并且在規(guī)定時間內(nèi)可以被觀察到，即靈敏性檢查。方法適用性試驗主要目的是判斷采用的方法，薄膜過濾法或者直接接種法，是否適用于要檢測的這種產(chǎn)品，方法適用性試驗可以與供試品的無菌檢查同時進行。藥典中從檢測數(shù)量、檢驗量、陰/陽性對照、接種要求、培養(yǎng)觀察和結(jié)果判讀全都進行了細致規(guī)定。關(guān)于無菌檢查法，美國、日本、歐洲藥典等基本實現(xiàn)藥典協(xié)調(diào)，這里重點對比中美法規(guī)對于供試品的無菌檢測要求差異。

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隨著新型生物制品的涌出，細胞制品的普及，無菌檢查提出了新要求。傳統(tǒng)培養(yǎng)方法因為至少需要14天的培養(yǎng)時間才可以出結(jié)果，因此在時效性上無法滿足這些生物制品的放行檢需求，也包括原物料的質(zhì)檢需求。

01

關(guān)于無菌檢測替代方法的法規(guī)要求

laws and regulations

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2020年版《中國藥典》第四部通則9201，藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則提出，隨著微生物學(xué)的迅速發(fā)展，制藥領(lǐng)域不斷引入了一些新的微生物檢驗技術(shù)，大體可分為三類：

① 基于微生物生長信息的檢驗技術(shù)，如生物發(fā)光技術(shù)、電化學(xué)技術(shù)、比濁法等；

② 直接測定被測介質(zhì)中活微生物的檢驗技術(shù)，如固相細胞計數(shù)法、流式細胞計數(shù)法等；

③ 基于微生物細胞所含有特定組成成分的分析技術(shù)，如脂肪酸測定技術(shù)、核酸擴增技術(shù)、基因指紋分析技術(shù)等。

《CAR-T細胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點》中提到，在可行的情況下，首選藥典方法用于無菌檢測，但考慮到Car-T細胞產(chǎn)品的特殊性，也鼓勵研究者開發(fā)快速的無菌檢測法，但應(yīng)與藥典方法平行進行，在獲得充分的比對數(shù)據(jù)后，結(jié)合無菌生產(chǎn)全過程的風(fēng)險評估設(shè)計放行策略，才有可能替代藥典方法。

USP<1071>Rapid microbial tests for release of sterile short-life products a risk-based aproach介紹了有效期較短的無菌產(chǎn)品放行的快速微生物測試方法， 包括ATP生物發(fā)光法、核酸擴增法、流式等，并詳細闡述了這些替代方法的特點。

EP 2.6.21 Nucleic acid amplification techniques介紹了核酸擴增法可作為替代方法，并詳細闡述了該方法作為替代法需驗證的性能。

核酸qPCR方法適用范圍廣，具有靈敏度高、特異性強、檢測時間短等特點，被廣泛應(yīng)用于基因工程藥物的相關(guān)檢驗中。武漢珈創(chuàng)生物通過對樣本處理方法和相關(guān)的qPCR檢測方法進行充分驗證，獨立開發(fā)了基于熒光探針qPCR方法的細菌/真菌快速檢測方法，經(jīng)驗證，該試劑盒與藥典方法具有可比性。

02

武漢珈創(chuàng)生物—細菌/真菌快速檢測試劑盒

CANVEST qPCR Detection Kit

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  • CANVEST® 細菌 qPCR 檢測試劑盒采用熒光探針 qPCR 技術(shù)，用于定性檢測細胞、細胞及基因治療產(chǎn)品以及其他生物制品中是否有細菌的污染。
本試劑盒中的引物探針可以對多種細菌（覆蓋200種以上常見病原菌）進行特異性檢測，與真菌、支原體、昆蟲、人類及動物細胞（豬源細胞除外）不存在交叉反應(yīng)。本試劑盒參照中國藥典 qPCR 方法檢測相關(guān)要求進行驗證，檢測限為100 CFU/mL。試劑盒中加入了內(nèi)部控制系統(tǒng)，內(nèi)部控制對照（IC）可在 PCR 擴增反應(yīng)階段加入，以判斷待檢樣本對擴增反應(yīng)是否存在抑制；也可在樣本提取階段加入，作為實驗整體對照，同時監(jiān)測提取得率以及樣本中可能存在的 PCR 抑制情況。操作步驟簡單，可批量操作。


  • CANVEST® 真菌 qPCR 檢測試劑盒主要適用于效期短、批量小，無法保證在產(chǎn)品使用前完成放行檢查的細胞類制品，也可用于檢測主細胞庫、工作細胞庫、病毒種子批是否有常見病原性真菌的污染。

本試劑盒中的引物探針可以對多種致病性真菌進行特異性檢測，與原核基因組、人等哺乳類動物基因組不存在交叉反應(yīng)，其核酸檢測限為 1-5genome copies/reaction，同時參照《中國藥典》(ChP 9201)、《歐洲藥典》（EP 5.1.6）和《美國藥典》(UPS 1223) ，從專屬性、檢測性、等效性、重現(xiàn)性和耐用性等 5 個方面進行了全面的驗證。操作簡單快捷，樣本丟失率低，還可降低試劑和操作過程中存在的污染風(fēng)險


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快速微生物檢測的相關(guān)法規(guī)

laws and regulations

  • 美國藥典-USP<1071>RAPID MICROBIAL TESTS FOR RELEASE OF STERILE SHORT-LIFE PRODUCTS A RISK-BASED APPROACH(無菌短貨架期產(chǎn)品放行的快速微生物檢查法: 依據(jù)風(fēng)險評估的方法)

  • 美國藥典-USP<1223>VALIDATION OF ALTERNATIVE MICROBIOLOGICAL METHODS(微生物替代方法驗證）

  • PDA TR33（中英文）-2013 可選擇的和快速的微生物檢測方法的評價驗證與執(zhí)行

  • 美國藥典-USP [71] STERILITY TESTS無菌檢查

  • 中國藥典—1101無菌檢查法

  • 中國藥典—9201藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則

  • 歐洲藥典EP.2.6.27 Microbiological Examination of Cell-based preparations (9.2)

  • CAR-T 細胞治療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測研究及非臨床研究考慮要點

  • 細胞類制品微生物檢查法草案擬公示稿

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